尊龙凯时组织细胞甘油酶试剂盒线性范围10-1200µmol/L

来源:印璐达日期:2025-02-22

尊龙凯时的甘油检测试剂盒是一种用于测定甘油含量的有效工具，特别是在甘油三酯水解过程中，甘油作为其产物，能够作为可靠的检测指标。该试剂盒具有优化步骤，能够方便地测定实体组织和细胞中的甘油含量，其线性范围为10-1200µmol/L。

原理

在ATP的存在下，甘油通过甘油激酶被磷酸化为3-磷酸甘油，随后再通过甘油磷酸氧化酶被氧化生成过氧化氢。在过氧化物酶的催化下，生色底物转化为苯kun亚胺，其光密度值与甘油浓度成正比。这一过程确保了甘油含量的准确测定。

此试剂盒适用于检测实体组织和细胞中的甘油浓度。

该试剂盒可用于105次微板测定或30次1ml比色杯测定，组成包括：
(1) 裂解液50ml
(2) R1试剂16ml
(3) R2试剂4ml
(4) 4mmol/L甘油标准品1ml（在4ºC保存可有效期达6个月）

进行实验所需设备包括酶标仪、生化分析仪或721、722型可见光分光光度计。最佳工作波长为550nm，如无此波长可依次选择570nm、530nm或490nm。

对于细胞（包括分化脂肪细胞）的裂解，可以通过消化和离心收集细胞，或直接在培养皿中进行裂解。通常在6孔板中单孔约存放2x10⁶个细胞，75cm²瓶约1x10⁷个细胞。裂解液的添加比例为每1~2x10⁶细胞添加0.1ml裂解液，震荡或涡旋后，静置10分钟。

处理动物组织时，需预先剪切和称重新鲜组织，避免冻存组织后解冻产生的测量误差。精确称重离心管，加入组织块后再称重以便计算组织重量，强烈建议按比例每1mg组织添加10µl裂解液，减少样品间的变异误差。

将适量的上清液转移到15ml离心管中进行后续检测，剩余的裂解液可以用于BCA法蛋白定量，或在-20ºC下保存。使用270ºC加热10分钟可灭活脂肪酶，注意可能出现的絮状沉淀。

根据4:1的比例，将4ml试剂R1与1ml试剂R2混合，即可得到工作溶液，建议立即使用或在4ºC下保存不超过1天，变色后需弃用。注意防范甘油的潜在污染。

使用蒸馏水、生理盐水或与样品缓冲液一致的液体，将4mM甘油标准品稀释为不同浓度，并设置0浓度对照管。待测样品体积为10µl，反应时间为10分钟，反应后的颜色在60分钟内稳定。

先用蒸馏水和工作液的空白管进行调零，然后测定各管的OD值并绘制标准曲线，以计算甘油浓度。使用Excel进行图表制作，依据各标准管OD值与浓度进行对应，以便更有效地得到结果。

通过以上步骤，您可以准确测定样品中的甘油含量，为生物医学研究提供可靠的数据支持。选择尊龙凯时的甘油检测试剂盒，助力您的研究事业。